流式細胞檢測實驗分類

　　1、流式細胞術(shù)（FlowCytometry，F(xiàn)CM）：

　　就是對在高速流動的鞘液包裹下的細胞、粒子進行分析和分選的技術(shù)，這種細胞或粒子是經(jīng)過特異熒光標記的。其特點是測量速度快，每秒鐘能測數(shù)千個乃*萬個細胞，且可進行多參數(shù)測量，另一特點是在分析的同時可把具有特征的細胞分離出來，這就是分選技術(shù)。

　　流式細胞檢測實驗重要參數(shù)：前向角散射（FSC）：前向角散射光的強度與細胞的大小有關(guān)，也就是說，同一個細胞群體，F(xiàn)SC強的，其細胞大一些，而FSC弱的，其細胞小一些。側(cè)向角散射（SSC）：側(cè)向角散射又稱90°散射或大角散射。側(cè)向角散射光對細胞膜、胞質(zhì)、核膜的折射率更為敏感，對胞內(nèi)較大的顆粒也會有反應。所以，側(cè)向角散射光的強弱可反應細胞內(nèi)精細結(jié)構(gòu)和顆粒的性質(zhì)。熒光信號（FL）：是細胞或細胞上的熒光染料被激光激發(fā)后發(fā)射出的熒光，不同的熒光染料其發(fā)射波長不同。通過熒光強度可將同一個細胞群體中的有熒光標記的細胞與無熒光標記的細胞區(qū)分開來，也就是我們通常所說的陽性細胞，也可以將陽性細胞中的高FL的細胞與低FL的細胞區(qū)分開來，也就是可以把強陽性細胞和弱陽性細胞區(qū)分開來。一般的流式細胞儀只裝有一個激光光源（488nm），可測出三個FL，即FL1、FL2、FL3。FL2-W指檢測熒光的脈沖寬度，區(qū)分單個細胞和雙聯(lián)體細胞FL2-H指脈沖高度，細胞單位面積上的熒光濃度FL2-A指脈沖面積，即細胞熒光總和。

　　2、細胞周期檢測：

　　細胞內(nèi)的DNA含量隨著細胞周期進程發(fā)生周期性變化。利用PI標記的方法，通過流式細胞儀對細胞內(nèi)DNA的相對含量進行測定，可分析細胞周期各時相的百分比，反映細胞的增殖狀態(tài)和非二倍體（異倍體）的DNA含量。其中PI即碘化丙錠，可以與細胞內(nèi)DNA和RNA結(jié)合，采用RNA抑制劑將RNA消化后，通過流式細胞術(shù)檢測與DNA結(jié)合的PI的熒光強度直接反映了細胞內(nèi)DNA含量的多少。

　　3、細胞增殖檢測

　　示蹤染料標記法：示蹤染料能與細胞發(fā)生非特異性的穩(wěn)定結(jié)合，主要有兩種結(jié)合方式：進入胞內(nèi)與蛋白質(zhì)共價結(jié)合，如CFSE和BRSE；嵌入細胞膜的磷脂雙分子層，與細胞非公價結(jié)合，如PKH類和CellVue類等。CFSE是活細胞染料，又稱CFDA-SE或CFDA，其標記細胞后對細胞毒性小，被激發(fā)后能發(fā)出很強熒光，且非常穩(wěn)定，只有當細胞分裂時，母細胞內(nèi)的染料會被平均分配到子細胞中，細胞的熒光信號減少一半，細胞分裂代數(shù)越多，信號降低程度越大。

　　4、細胞因子檢測

　　細胞因子是一類能在細胞間傳遞信息、具有免疫調(diào)節(jié)和效應等功能的蛋白或小分子多肽。根據(jù)功能可分為六大類：白細胞介素、干擾素、集落刺激因子、腫瘤壞死因子、生長因子和趨化因子。胞內(nèi)細胞因子：胞內(nèi)染色法（intracellularstainingassay）；胞間細胞因子：CBA法（cytometricbeadassay，流式微球陣列）。其優(yōu)點為單細胞水平，可多參數(shù)檢測。